ICS 67.050 CCS X 04 T/QAS 团体标准 T/QAS 075—2022 黑果枸杞及其制品中花青素（花色苷）的含 量测定 pH示差法 2022 - 05 - 12发布 2022 - 05 - 22实施 青海省标准化协会 发布 全国团体标准信息平台 T/QAS 075 —2022 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 -2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》 的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国科学院西北高原生物研究所提出。 本文件由 青海省标准化协会 归口。 本文件起草单位：中国科学院西北高原生物研究所 、青海省药品检验检测院、青海金麦杞生物科技 有限公司 。 本文件主要起草人： 谭亮、李玉林、海平、陈涛、王环、杲秀珍、刘亚蓉、杨凤梅、云忠祥、冀恬、 贺明珠、王硕、赵景阳、罗芳。 全国团体标准信息平台 T/QAS 075 —2022 1 黑果枸杞及其制品中花青素（花色苷）的含量测定 pH示差法 1 范围 本文件规定了黑果枸杞及其制品中 花青素 （花色苷） 的含量测定——pH示差法的术语 和定义、 原理、 试剂和材料、仪器 和设备、分析步骤、 数据处理 、结果表示和精密度。 本文件适用于黑果枸杞 鲜果、干果及其制品 中花青素（花色苷）的测定，检出限和定量限如表 1。 表1 黑果枸杞鲜果、干果及其制品 中花青素（花色苷）测定 的检出限和定量限 项目 检出限 定量限 黑果枸杞鲜果 /（mg/100g） 7.04 21.3 黑果枸杞干果 /（mg/100g） 28.2 85.3 黑果枸杞片 /（mg/100g） 42.2 128.0 黑果枸杞提取物 /（g/100g） 0.352 1.07 黑果枸杞冻干粉 /（mg/100g） 70.4 213.3 黑果枸杞胶囊 /（mg/100g） 42.2 128.0 黑果枸杞饮料 /（mg/100mL） 0.633 1.92 黑果枸杞酒 /（mg/100mL） 0.282 0.853 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件。 3.1 黑果枸杞 Lycium ruthenicum Murr. 茄科（Solanceae ）枸杞属（ Lycium L.）多棘刺灌木 的球状或顶端稍有凹陷的紫黑色成熟果实 。 3.2 花青素（花色苷） anthocyan ins 花色素与糖以糖苷键结合而成 的具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构 的类黄酮化合物 。 全国团体标准信息平台 T/QAS 075 —2022 2 4 原理 溶液pH不同，花青素的存在形式也不同。在 pH≤3时，其溶液呈现稳定的红色（花烊正离子），随 着pH值增大，在 pH=4～6时，其溶液的颜色逐渐褪至无色（甲醇假碱和查尔酮），在 pH=8～10时变成紫 色或蓝色（醌式（脱水）碱）。花青素发色团的结构转换是 pH的函数，起干扰作用的褐色降解物的特性 不随pH变化。根据朗伯 -比耳定律，在两个不同的 pH下，花青素溶液的吸光度差值与花青素的含量成正 比。因此，通过两个 pH，同一波长（以花青素最 大可见吸收波长）下的吸光度差值以及在 700 nm处测得 的用于校正略微浑浊供试液的吸光度值可求得花青素含量。 5 试剂和材料 5.1 试剂 5.1.1 试验用水应符合 GB/T 6682 规定的三级水。 5.1.2 氯化钾（KCl）：含量 ≥99.5 %。 5.1.3 结晶乙酸钠（CH3COONa ·3H2O）：含量≥ 99.0 %。 5.1.4 浓盐酸（HCl）：含量 36.0 %～38.0 %。 5.1.5 无水乙醇 （CH3CH2OH）：质量分数≥ 99.7 %。 5.2 试剂配制 5.2.1 稀盐酸溶液（ 2 mol/L）：准确移取16.6 mL浓盐酸至 100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇 匀。室温下保存 ，保存期 1个月。 5.2.2 乙醇溶液（ 80 %）：量取无水乙醇 800 mL于1 000 mL 容量瓶中， 加水稀释至刻度，摇匀。 室 温下保存，保存期 1个月。 5.2.3 氯化钾缓冲溶液（ 0.025 mol/L ，pH1.0）：称取1.86 g氯化钾固体 （准确至 ±1 mg）至2 000 mL 烧杯中， 加水约 980 mL溶解，先加入浓盐酸 6 mL， 然后用 2 mol/L稀盐酸溶液 调节溶液 pH值至1.0±0.05 后，转移至 1 000 mL 容量瓶中， 加水稀释至刻度，摇匀。 室温下保存，保存期 3个月。 5.2.4 乙酸钠缓冲溶液（ 0.4 mol/L ，pH4.5）：称取54.43 g结晶乙酸钠固体（准确至 ±1 mg）至2 000 mL烧杯中，加水约 960 mL溶解，先加入浓盐酸 19 mL，然后用 2 mol/L稀盐酸溶液 调节溶液 pH值至 4.5±0.05后，转移至 1 000 mL 容量瓶中， 加水稀释至刻度，摇匀。 室温下保存，保存期 3个月。 6 仪器和设备 6.1 分析天平：感量 1 mg和0.1 mg。 6.2 紫外-可见分光光度仪： 配有1 cm比色皿。 6.3 pH计：精度 0.01。 6.4 超声波清洗机：频率 40 KHz。 6.5 台式离心机：转速 ≥8 000 r/min 。 6.6 食物粉碎机：可将固体样品粉碎并通过 425 μm（40目）筛和 250 μm（60目）筛。 6.7 匀浆分散机：转速 ≥15 000 r/min 。 7 分析步骤 全国团体标准信息平台 T/QAS 075 —2022 3 7.1 试样制备 7.1.1 黑果枸杞鲜果 用四分法取适量或取全部， 除去果、柄以外肉眼可见的黑果枸杞枝、叶、碎果、小石子、土颗粒等 杂质后， 用匀浆分散机以 15 000 r/min 转速匀浆分散 20 s制成匀浆后，立即用于检测，如需加水应记录 加水量。整个检测过程应在避光条件下进行，以下相同。 7.1.2 黑果枸杞干果 用四分法取适量或取全部，除去 本文件7.1.1所述肉眼 可见杂质后，取有代表性试样 50 g～100 g， 用食物粉碎机粉碎后，过 40目筛，混匀后立即用于检测。 7.1.3 黑果枸杞片 用四分法取适量或取全部，取有代表性试样 25 g～50 g，用食物粉碎机粉碎后，过 60目筛，混匀后 立即用于检测。 7.1.4 黑果枸杞提取物、 冻干粉、 胶囊 先将胶囊内容物倒出，然后将试样置于能容纳 2～5倍试样体积的带盖容器中，通过反复振摇和颠倒 容器使试样充分混匀均质后立即用于检测。 7.1.5 黑果枸杞饮料、酒等液体制品 通过反复振摇和颠倒盛装容器使试样充分混匀均质后立即用于检测。 7.2 供试品溶液制备 7.2.1 黑果枸杞固体、半固体试样溶液 7.2.1.1 称取一定量已处理试样（干果 、冻干粉、片剂、胶囊内容物 0.5 g，鲜果匀浆 5.0 g，准确至 ±1 mg ；提取物 0.1 g，准确至 ±0.1 mg），置于150 mL具塞磨口锥形瓶中，准确加入 50 mL提取液 （浓HCl:80 % 乙醇溶液 = 3:97,v/v ），密塞，称定重量。 7.2.1.2 放入超声波清洗机中于 50 ℃超声提取 30 min，每隔10 min振摇1次，保持固相完全分散。 7.2.1.3 提取结束后冷却至室温，再次称定重量，用提取液补足减失的重量，混匀。取部分提取液以 8 000 r/min 离心3 min，取上清液备用。 7.2.2 黑果枸杞液体试样溶液 7.2.2.1 准确移取已 处理液体试样 1.0 mL～10 mL，置于150 mL具塞磨口锥形瓶中，准确加入 50 mL 提取液（浓 盐酸:80 %乙醇溶液 = 3:97,v/v ），密塞，称定重量。 7.2.2.2 放入超声波清洗机中于 50 ℃超声提取 10 min，每隔3 min振摇1次，保持液相完全分散。 7.2.2.3 按本文件7.2.1.3要求进行操作。 7.3 供试品检测溶液制备 7.3.1 黑果枸杞固体、半固体供试品 检测溶液 7.3.1.1 按本文件7.2.1要求制备的供试品溶液先加入提取液（浓 盐酸:80 %乙醇溶液 = 3:97,v/v ） 稀释2～10倍（含有5 mg～60 mg花青素），再用缓冲 溶液稀释 5倍，制备 两份供试品 检测溶液。 全国团体标准信息平台 T/QAS 075 —2022 4 7.3.1.2 其中一份用氯化钾缓冲溶液（ 0.025 mol/L, pH1.0 ）稀释（ 1 mL供试品溶液 + 4 mL氯化钾 缓冲溶液），另一份用乙酸钠缓冲溶液（ 0.4 mol/L, pH4.5 ）稀释（ 1 mL供试品溶液 + 4 mL醋酸钠缓 冲溶液）。 7.3.2 黑果枸杞液体供试品 检测溶液 按本文件7.2.2要求制备的供试品溶液 先加入提取液（浓盐酸 :80 %乙醇溶液