ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2694—2015 饲料添加剂氨基酸锰及蛋白锰 络（螯）合强度的测定 Determination of complexation (chelation) strengths of manganese-amino acids and manganese-proteinates as feed additives 行业标准信息服务平台 2015-02-09发布 2015-05-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2694—2015 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口。 本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、哈尔滨德邦鼎立生物科技有限公司、济宁 和实生物科技有限公司。 本标准主要起草人：罗绪刚、张伶燕、李素芬、吕林、邓志刚、李华、刘向伟、张雪元、王彦平、张丽阳。 行业标准信息服务平台 NY/T2694—2015 饲料添加剂氨基酸锰及蛋白锰络（螯）合强度的测定 1范围 本标准规定了饲料添加剂氨基酸锰及蛋白锰络（螯）合强度的测定方法。 本标准适用于饲料添加剂氨基酸锰及蛋白锰络（螯）合强度的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T13885动物饲料中钙、铜、铁、镁、锰、钾、钠和锌含量的测定原子吸收光谱法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 氨基酸锰及蛋白锰络（螯）合强度complexation（chelation）strengthsof manganese-aminoacids and manganese-proteinates 锰元素与有机配位体之间形成的配位键的强度，以Q（Quotientofformation）值表示，即在离子强 度为0.1mol/L、pH=8.0的BES缓冲底液中，用悬汞电极极谱仪分别测定锰浓度为5×10-4mol/L的 硫酸锰的半波电位E1/2与锰浓度为3.5X×10-3mol/L的氨基酸锰或蛋白锰的半波电位E/2，以2个半波 络（螯）合强度、100~1000时为强络（螯）合强度及1000以上时为极强络（螯）合强度。 4原理 Mn（Hg），但氨基酸锰或蛋白锰需先打开配位键释放出锰离子，锰离子与有机配位体形成的配位键的强 度越大，打开配位键所需的电压就越大，即半波电位的绝对值也越大。因此，在特定条件下，通过测定氨 基酸锰或蛋白锰的半波电位，利用其与硫酸锰半波电位的差值，即可计算氨基酸锰或蛋白锰的络（螯）合 强度。 5试剂和溶液 本标准方法所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的一级水。 5.1N,N-双(2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸(BES)。 5.2氢氧化钠。 5.30.1mol/LMnSO,溶液：称取MnSO,·HzO1.691g，定容于100mL容量瓶中。 5.4BES缓冲液（离子强度为0.1mol/L、pH=8.0）：称取BES24.006g溶于500mL水中，称NaOH 4.504g溶于400mL水中；将上述NaOH溶液缓缓倒人BES溶液中，调节pH到8.0后，转移至 1 NY/T 2694—2015 1000mL容量瓶中，定容至刻度。 6仪器和设备 6.1恒温水浴振荡器。 6.2分析天平，感量0.0001g。 6.3实验用样品粉碎机或研钵。 6.4悬汞电极极谱仪。 7采样和试样制备 按GB/T14699.1的规定采集试样，并按GB/T20195的规定以四分法缩减分取试样，混勾装人 磨口瓶中低温保存备用。 8分析步骤 8.1氨基酸锰及蛋白锰样品中总锰含量测定 称取氨基酸锰或蛋白锰样品0.2g，精确至0.0001g，其他步骤按GB/T13885中的规定操作，用 以测定试样中的总锰含量。 8.2锰浓度约为0.7mol/L的氨基酸锰或蛋白锰过滤液制备及锰含量分析 8.2.1氨基酸锰或蛋白锰过滤液的制备 氨基酸锰或蛋白锰样品称样量m，数值以克（g）表示，按式（1)计算。 CXVXM (1) m= WX入 式中： 制备的氨基酸锰或蛋白锰过滤液锰浓度，单位为摩尔每升(mol/L)(c=0.7)； V———过滤液的体积,单位为升(L); M—锰的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)（M=54.94）； 氨基酸锰或蛋白锰样品的锰含量，单位为百分率（%）； m 氨基酸锰或蛋白锰的溶出率按70%计算（入=0.7)。 根据式（1)的计算结果称取氨基酸锰或蛋白锰样品，精确至0.0001g，于100mL锥形瓶中，加人 50mL水，密封。将以上溶液置于37℃恒温水浴振荡器中振荡8h，5000r/min离心20min，干过滤后备 用。 8.2.2氨基酸锰或蛋白锰过滤液中锰浓度分析 准确移取过滤液1mL，其他步骤按GB/T13885中的规定操作，用以测定过滤液中的锰含量，并换 算为过滤液中的锰浓度。 8.3极谱待测溶液的制备 8.3.1锰浓度为5×10-4mol/L硫酸锰极谱待测液的制备 电解槽中应加人的硫酸锰溶液的体积V,，数值以微升（μL)表示，按式（2)计算。 Vi = VoXGX1000 .(2) C2 式中： 电解槽中溶液的终体积，单位为毫升（mL）； 电解槽中硫酸锰极谱待测液的最终锰浓度，单位为摩尔每升（mol/L)（ci=5×10-4）； 硫酸锰溶液（5.3)的锰浓度，单位为摩尔每升（mol/L)（c2=0.1)。 C2 2 NY/T2694—2015 根据式(2)计算的体积V1，向电解槽中加人硫酸锰溶液(5.3)，再加BES缓冲液（5.4)稀释至所用体 积。本溶液现配现用。 8.3.2锰浓度为3.5×10-3mol/L的氨基酸锰或蛋白锰极谱待测溶液的制备 电解槽中应加人的氨基酸锰或蛋白锰过滤液体积V2，数值以微升（μuL)表示，按式（3)计算。 (3) C4 式中： V。一一电解槽中溶液的终体积,单位为毫升(mL)； 电解槽中氨基酸锰或蛋白锰极谱待测液的最终锰浓度，单位为摩尔每升（mol/L)（c3一 C3 3.5X10-3); -氨基酸锰或蛋白锰过滤液（8.2.1)的实测锰浓度，单位为摩尔每升(mol/L)。 CA 根据式（3)计算需要加人的氨基酸锰或蛋白锰样品过滤液体积，向电解槽中加人氨基酸锰或蛋白锰 过滤液（8.2.1），再加BES缓冲液（5.4)稀释至所用体积。本溶液现配现用。 8.4极谱待测液半波电位的测定 根据各自仪器性能调至最佳状态。 悬汞电极极谱仪工作参考条件：在室温（25士1)℃时，用悬汞电极极谱仪测定硫酸锰及氨基酸锰或 蛋白锰极谱待测液的半波电位E1/2。 实验技术：根据仪器选择线性扫描或脉冲扫描。 实验参数：充氮时间为300s。 平衡时间为5s。 扫描范围为-1.80V～-1.20V。 扫描速度为10mV/s。 采样间隔为1mV。 9结果计算 氨基酸锰或蛋白锰的络(螯)合强度值Q按式(4)计算。 Q = 10(2XAE/2)/0. 05916 (4) 式中： Qr 氨基酸锰或蛋白锰的络（螯）合强度值； 2 锰从其氧化态（Mn?+）到还原态（Mn）时的电子转移数目； △E1/2 硫酸锰半波电位与氨基酸锰或蛋白锰半波电位的差值，单位为伏特（V)； 0.05916 温度为25℃时的常数。 10结果表示 11重复性 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值应不大于这2个测定值的算术平均值的 20%。 3 NY/T2694—2015 根据式(2)计算的体积V1，向电解槽中加人硫酸锰溶液(5.3)，再加BES缓冲液（5.4)稀释至所用体 积。本溶液现配现用。 8.3.2锰浓度为3.5×10-3mol/L的氨基酸锰或蛋白锰极谱待测溶液的制备 电解槽中应加人的氨基酸锰或蛋白锰过滤液体积V2，数值以微升（μuL)表示，按式（3)计算。 (3) C4 式中： V。一一电解槽中溶液的终体积,单位为毫升(mL)； 电解槽中氨基酸锰或蛋白锰极谱待测液的最终锰浓度，单位为摩尔每升（mol/L)（c3一 C3 3.5X10-3); -氨基酸锰或蛋白锰过滤液（8.2.1)的实测锰浓度，单位为摩尔每升(mol/L)。 CA 根据式（3)计算需要加人的氨基酸锰或蛋白锰样品过滤液体积，向电解槽中加人氨基酸锰或蛋白锰 过滤液（8.2.1），再加BES缓冲液（5.4)稀释至所用体积。本溶液现配现用。 8.4极谱待测液半波电位的测定 根据各自仪器性能调至最佳状态。 悬汞电极极谱仪工作参考条件：在室温（25士1)℃时，用悬汞电极极谱仪测定硫酸锰及氨基酸锰或 蛋白锰极谱待测液的半波电位E1/2。 实验技术：根据仪器选择线性扫描或脉冲扫描。 实验参数：充氮时间为300s。 平衡时间为5s。 扫描范围为-1.80V～-1.20V。 扫描速度为10mV/s。 采样间隔为1mV。 9结果计算 氨基酸锰或蛋白锰的络(螯)合强度值Q按式(4)计算。 Q = 10(2XAE/2)/0. 05916 (4) 式中： Qr 氨基酸锰或蛋白锰的络（螯）合强度值； 2 锰从其氧化态（Mn?+）到还原态（Mn）时的电子转移数目； △E1/2 硫酸锰半波电位与氨基酸锰或蛋白锰半波电位的差值，单位为伏特（V)； 0.05916 温度为25℃时的常数。 10结果表