ICS 67.060 X 11 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2638—2014 稻米及制品中抗性淀粉的测定 分光光度法 Determination of resistant starch in rice and products- Spectrophotometry method 行业标准信息服务平台 2014-10-17发布 2015-01-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2638—2014 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位：中国水稻研究所、农业部稻米及制品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：方长云、徐霞、朱智伟、段彬伍、陈能， 行业标准信息服务平台 NY/T2638—2014 稻米及制品中抗性淀粉的测定 分光光度法 1范围 本标准规定了稻米及制品中抗性淀粉测定的分光光度法。 本方法适用于抗性淀粉含量2%~64%的稻米及制品的测定。 2规范性引用文件 下列文件对本文件的引用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 用α-胰腺淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶将试样中非抗性淀粉水解为葡萄糖，然后加入乙醇，经离心获 得抗性淀粉颗粒，将之溶于氢氧化钾溶液，用淀粉葡萄糖苷酶水解成葡萄糖后，与葡萄糖氧化酶一过氧 化物酶反应产生显色复合物，在510nm测定其吸光度值，吸光度值与抗性淀粉含量成正比。 4试剂 除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的三级水。 4.1氢氧化钠(NaOH)。 4.2氢氧化钾(KOH)。 4.3二水合氯化钙(CaCl2·2H2O)。 4.4叠氮化钠(NaN3）。 警告一一叠氮化钠为剧毒物品，操作不当可引起爆炸。 业标准信息服务平台 4.6盐酸(HCI)。 4.7马来酸(C,H,O.)。 4.8苯甲酸(CH,O2)。 4.94-氨基安替比林(CiH13N:O)。 4.10对羟基苯甲酸(C,H.O3)。 4. 11 乙醇(CH;CH2OH)。 4. 12冰乙酸(CH,COOH)。 4.13α-胰腺淀粉酶。 4.14葡萄糖氧化酶。 4.15过氧化物酶。 4.16D-葡萄糖标准品（CH2O，纯度：99.5%)。 4.17氢氧化钠溶液[c(NaOH)=4.0mol/L]：称取160.0g氢氧化钠加适量水溶解后定容至1000 mL. 4.18氢氧化钠溶液[c(NaOH)=2.0mol/L]：称取80.0g氢氧化钠加适量水溶解后定容至1000mL。 1 NY/T2638—2014 4.19氢氧化钾溶液[c(KOH)=2.0mol/L]：称取112.2g氢氧化钾加适量水溶解后定容至1000mL。 该溶液在室温下可保存12个月。 4.20盐酸溶液Lc（HCI)=2.0mol/Ll量取180.0mL盐酸，加适量水并稀释至1000mL。 4.21苯甲酸溶液[c(C,H.COOH)=0.2%]：称取0.2g苯甲酸溶于水定容至100mL。 4.22马来酸钠缓冲液[c(CH.O,COONa)=100mmol/L，pH6.0]：称取23.2g马来酸溶于1600mL 水中，用氢氧化钠溶液（4.17)调至pH为6.0，然后加入0.6g二水合氯化钙和0.4g叠氮化钠，最后定 容至2000mL。该溶液在4℃可保存12个月。 4.23乙酸钠缓冲液Lc(CH,COONa)=1.2mol/L，pH3.8]量取70mL冰乙酸至800mL水中，用氢 氧化钠溶液（4.17）调至pH为3.8，最后定容至1000mL。该溶液在室温下可保存12个月。 4.24乙酸钠缓冲液[c（CH，COONa)=100mmol/L，pH4.5]：量取5.8mL冰乙酸至900mL水中，用 氢氧化钠溶液（4.17）调至pH为4.5，最后定容至1000mL。该溶液可在4℃保存2个月。 4.25乙醇溶液[c(CHsCHzOH)=50%，体积分数]:500mL无水乙醇加水定容至1000mL。该溶液 在室温下可保存12个月。 4.26淀粉葡萄糖苷酶原液AMG（3300U/mL）：直接购买使用。该溶液在4℃可保存5年。 4.27淀粉葡萄糖苷酶使用液（300U/mL）：吸取2.0mLAMG(4.26)用马来酸钠缓冲液（4.22)稀释至 22mL，分装于聚丙烯塑料管，放于一20℃保存。 4.28α~胰腺淀粉酶悬浮液[10mg(30U/mL)+AMG(3U/mL)]：称取1.0gα-胰腺淀粉酶溶于100 ml马来酸钠缓冲液（4.22）中，搅拌5min。加入1.0mL淀粉葡萄糖苷酶使用液（4.27），混匀后， >1500g离心10min，取上清液。该溶液现配现用。 4.29GOPOD氨基安替比林储备液：称取136.0g磷酸二氢钾，42.0g氢氧化钠和30.0g对羟基苯 甲酸至900mL水中溶解，用盐酸溶液（4.20）或氢氧化钠溶液（4.18）调节该溶液的pH至7.4,定容至 1000mL，加人1.0g叠氮化钠，溶解混匀。该溶液于4℃可保存3年。 4.30GOPOD一氨基安替比林缓冲液：吸取50.00mLGOPOD一氨基安替比林储备液（4.29)定容至 1 000 mL。 4.31GOPOD一氨基安替比林混合液[葡萄糖氧化酶（>12000U/L)+过氧化物酶（>650U/L)+4- 氨基安替比林0.4mmol/L]:称取300mg葡萄糖氧化酶、4mg过氧化物酶和80mg4-氨基安替比林混 合，溶于1000mLGOPOD氢基安替比林缓冲液（4.30）中。此溶液需避光保存，一20℃可保存1年。 4.32D-葡萄糖标准储备液（1.0g/L）称取1.00gD-葡萄糖（99.5%，无结晶水，分析纯）至900mL 苯甲酸溶液（4.21），定容至1000mL。室温下密封保存时间可保5年。 信息服务平台 5仪器 5.1分光光度计。 5.2分析天平（±0.0001g)。 5.3离心机（3000g）。 5.4 pH计。 5.5组织捣碎机。 5.6水浴摇床：可设定为100次/min直线运动，振荡距离35mm。 5.7涡旋振荡器。 5.8磁力搅拌器。 5.9磁力搅拌棒（5mm×15mm）。 5.10计时器。 2 NY/T2638—2014 4.19氢氧化钾溶液[c(KOH)=2.0mol/L]：称取112.2g氢氧化钾加适量水溶解后定容至1000mL。 该溶液在室温下可保存12个月。 4.20盐酸溶液Lc（HCI)=2.0mol/Ll量取180.0mL盐酸，加适量水并稀释至1000mL。 4.21苯甲酸溶液[c(C,H.COOH)=0.2%]：称取0.2g苯甲酸溶于水定容至100mL。 4.22马来酸钠缓冲液[c(CH.O,COONa)=100mmol/L，pH6.0]：称取23.2g马来酸溶于1600mL 水中，用氢氧化钠溶液（4.17)调至pH为6.0，然后加入0.6g二水合氯化钙和0.4g叠氮化钠，最后定 容至2000mL。该溶液在4℃可保存12个月。 4.23乙酸钠缓冲液Lc(CH,COONa)=1.2mol/L，pH3.8]量取70mL冰乙酸至800mL水中，用氢 氧化钠溶液（4.17）调至pH为3.8，最后定容至1000mL。该溶液在室温下可保存12个月。 4.24乙酸钠缓冲液[c（CH，COONa)=100mmol/L，pH4.5]：量取5.8mL冰乙酸至900mL水中，用 氢氧化钠溶液（4.17）调至pH为4.5，最后定容至1000mL。该溶液可在4℃保存2个月。 4.25乙醇溶液[c(CHsCHzOH)=50%，体积分数]:500mL无水乙醇加水定容至1000mL。该溶液 在室温下可保存12个月。 4.26淀粉葡萄糖苷酶原液AMG（3300U/mL）：直接购买使用。该溶液在4℃可保存5年。 4.27淀粉葡萄糖苷酶使用液（300U/mL）：吸取2.0mLAMG(4.26)用马来酸钠缓冲液（4.22)稀释至 22mL，分装于聚丙烯塑料管，放于一20℃保存。 4.28α~胰腺淀粉酶悬浮液[10mg(30U/mL)+AMG(3U/mL)]：称取1.0gα-胰腺淀粉酶溶于100 ml马来酸钠缓冲液（4.22）中，搅拌5min。加入1.0mL淀粉葡萄糖苷酶使用液（4.27），混匀后， >1500g离心10min，取上清液。该溶液现配现用。 4.29GOPOD氨基安替比林储备液：称取136.0g磷酸二氢钾，42.0g氢氧化钠和30.0g对羟基苯 甲酸至900mL水中溶解，用盐酸溶液（4.20）或氢氧化钠溶液（4.18）调节该溶液的pH至7.4,定容至 1000mL，加人1.0g叠氮化钠，溶解混匀。该溶液于4℃可保存3年。 4.30GOPOD一氨基安替比林缓冲液：吸取50.00mLGOPOD一氨基安替比林储备液（4.29)定容至 1 000 mL。 4.31GOPOD一氨基安替比林混合液[葡萄糖氧化酶（>12000U/L)+过氧化物酶（>650U/L)+4- 氨基安替比林0.4mmol/L]:称取300mg葡萄糖氧化酶、4mg过氧化物酶和80mg4-氨基安替比林混 合，溶于1000mLGOPOD氢基安替比林缓冲液（4.30）中。此溶液需避光保存，一20℃可保存1年。 4.32D-葡萄糖标准储备液（1.0g/L）称取1.00gD-葡萄糖（99.5%，无结晶水，分析纯）至900mL 苯甲酸溶液（4.21），定容至1000mL。室温下密封保存时间可保5年。 信息服务平台 5仪器 5.1分光