(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210229584.4 (22)申请日 2022.03.09 (71)申请人 宁波市第一医院 地址 315010 浙江省宁波市柳汀街59号 (72)发明人 黄毅　孙杰　高翔　聂晟　 (74)专利代理 机构 宁波奥圣专利代理有限公司 33226 专利代理师 何仲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于检测与脑动静脉畸形相关的MYH10基因 甲基化程度的试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了用于检测与脑动静脉畸形相 关的MYH10基因甲基化程度的试剂盒及其应用， 特点是该试剂盒内包括一对 MYH10基因DNA甲基 化特异性扩增引 物， 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1 和SEQ ID NO.2所示及一个 MYH10基因DNA甲基化 特异性测序引 物， 核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所 示；MYH10基因DNA被检测序列所在区域为基因 内 CpG28甲基化岛内特定位置并通过焦磷酸测序技 术进行DNA甲基化水平分析； MYH10基因DNA甲基 化水平与脑动静脉畸形的患病率呈正相关； 优点 是该诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上 实现对脑动静脉畸形的检测， 检测 效率高， 针对 性强。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图3页 CN 114592050 A 2022.06.07 CN 114592050 A 1.一种用于检测与脑动静脉畸形相关的 MYH10基因甲基化程度的试剂盒， 其特征在于 包括一对 MYH10基因甲基化特异性扩增引物及一个 MYH10基因甲基化特异性测序引物， 其中 所述的MYH10基因甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示： 5' ‑ ATTTTAGTAGGTTTTTTAGGGTGTTGAT‑3’； 所述的MYH10基因甲基化特异性扩增 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示： 5 ’ ‑ Biotin‑ATTCATATAC CCTCCCCAAAAT‑3’； 所述的MYH10基因甲基化特异性测序引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示： 5 ’ ‑ GTTGGTTTAGGTGGTATTATTTA‑3’。 2.根据权利要求1所述的用于检测与脑动静脉畸形相关的 MYH10基因甲基化程度的试 剂盒， 其特征在于： 所述的 MYH10基因DNA被检测序列所在区域为基因的CpG28甲基化岛 Chr17: 8,380,173 ‑8,380,539区域内。 3.根据权利要求2所述的用于检测与脑动静脉畸形相关的 MYH10基因甲基化程度的试 剂盒， 其特 征在于： 所述的C hr17: 8,380,173 ‑8,380,539区域内7个CpG位 点的具体位置为： 。 4.根据权利要求3所述的用于检测与脑动静脉畸形相关的 MYH10基因甲基化程度的试 剂盒， 其特征在于： 所述的 MYH10基因DNA被检测序列采用焦 磷酸测序技术对 MYH10基因内的 7个CpG位 点进行DNA甲基化水平分析。 5.一种用于检测与脑动静脉畸形相关的 MYH10基因启动子区甲基化程度的试剂 盒在制 备检测脑动静脉畸形 试剂或者辅助诊断脑动静脉畸形 试剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114592050 A 2用于检测与脑动静脉畸形相关的MY H10基因甲 基化程度的试 剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及脑动静脉畸形的辅助诊断技术领域， 尤其是涉及一种用于检测与脑动 静脉畸形相关的 MYH10基因甲基化 程度的试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]脑动静脉畸形(Brain  arteriovenous  malformation， BAVM)是一种先天性疾病， 主要是由于胚胎发育过程中脑血管形成发生变异， 形成混乱的血管团。 BAVM最常见且严重 的临床症状是因 畸形血管破裂而导致的脑出血， 出血率为1.3 –3.9%。 畸形血管一旦破裂出 血， 不仅会给患者造成生命威胁， 而且有较大可能留下不同程度的残疾和 后遗症。 因患者多 为20‑40岁青壮年， BAVM不仅使其丧失工作能力， 也影响到生活自理能力， 给家庭和社会造 成沉重的负 担。 因此， 对于BAVM的早期诊断、 及时治疗势在必行， 具有重要的临床意义。 近年 来的研究证明， 血 管发育相关基因DNA甲基化 程度在BAVM的发生发展中扮演着重要角色。 [0003]肌球蛋白重肽10 （M yosin heavy chain 10，MYH10） 基因位于17号 染色体， 其编码 的蛋白是肌球蛋白超家族的成员， 是一种传统的非肌肉肌球蛋白。 肌球蛋白是一种肌动蛋 白依赖性运动蛋白， 具有多种功能， 包括调节细胞分裂、 细胞运动和细胞极性。 MYH10在心 肌， 肺脏， 动脉血管等多种组织中有较高的表达。 目前多项研究结果显示， MYH10可能是动脉 粥样硬化的高危预警指标。 MYH10的表达量与血管平滑肌细胞的数量呈正相关， 而与动脉粥 样硬化患者内膜中层厚度呈负相关。 MYH10基因突变可能改变体内血管细胞增殖和 迁移导 致血管发育缺陷， 进而引发血管相关病变。 研究者通过小鼠动物模型的研究发现， MYH10在 小鼠心脏发育和胚胎期血管系统的形成有着重要的作用。 在临床研究中， 研究者也发现 MYH10在腹主动脉瘤中表达量显著升高， 并且 可以作为腹主动脉瘤的一个潜在分子标志物。 由此可知， MYH10与血管相关病变密切相关。 而脑动静脉畸形被认 为是一种在胚胎发育期间 受内部或者外界因素影响导致血管发育异常导致的疾病。 MYH10表达量的异常很有可能在 血管系统形成的初期产生影响， 进而导致该疾病的发生和发展。 脑动静脉畸形患者血液中 MYH10基因表达量或者DNA甲基化程度很有可能与疾病的进展相关。 目前， 国内外没有公开 任何关于 MYH10基因DNA甲基化与脑动静脉畸形相关的研究报道。 发明内容 [0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种检测方便、 针对性强、 检测准确率高的用 于检测与脑动静脉畸形相关的 MYH10基因甲基化程度的试剂盒及其应用， 其中 MYH10基因 DNA甲基化水平与脑动静脉畸形的患病 率呈正相关， 可通过检测 MYH10基因DNA甲基化程度 辅助诊断脑动静脉畸形。 [0005]本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为： 一种用于检测与脑动静脉畸形相 关的MYH10基因甲基化程度的试剂盒， 包括一对 MYH10基因甲基化特异性扩增引物及一个 MYH10基因甲基化特异性测序引物：说　明　书 1/4 页 3 CN 114592050 A 3