(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210224393.9 (22)申请日 2022.03.09 (71)申请人 扬州大学 地址 225009 江苏省扬州市大 学南路88号 (72)发明人 王益军　杜文慧　李维　陈煜东　 王珊珊　 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/82(2006.01) A01H 5/00(2018.01) A01H 6/46(2018.01) (54)发明名称 玉米长链非编码RNA l ncRNA25659及其用途 (57)摘要 本发明公开了一种来源于玉米的长链非编 码RNA lncRNA25659及其用途 ， 所述的 lncRNA25659的核苷酸序列如SEQID  NO.1所示， 本发明通过RT ‑PCR证实lncRNA25659的表 达被赤 霉素处理所抑制； 通过CRISPR/Cas9技术， 编辑 lncRNA25659的转基因株系， 与转基因受体相比， 其株高、 第2叶鞘长、 内源赤霉素含量显著增加。 这表明lncRNA2 5659通过应答赤霉素诱导影响植 物的株高。 权利要求书1页 说明书6页 序列表3页 附图3页 CN 114540357 A 2022.05.27 CN 114540357 A 1.一种来源于玉米的长链非编码RNA， 其为lncRNA25659， 其特征在于， 所述 lncRNA25659的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.用于扩增权利要求1所述的长链 非编码RNA  lncRNA25659的引物对， 其核苷酸序列分 别如SEQ ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示。 3.含有权利要求1所述长链非编码RNA  lncRNA25659的植物CRIS PR/Cas9载体。 4.含有权利要求3所述 植物CRIS PR/Cas9载体的重组菌 。 5.权利要求1所述的长链非编码RNA  lncRNA25659、 权利要求3所述的植物CRISPR/Cas9 载体或权利要求 4所述的植物CRIS PR/Cas9载体重组菌在 如下a)‑c)至少一项中的用途： a)促进植物株高增 加； b)促进植物第2叶鞘变长； c)促进植物内源赤霉素GA3含量增加。 6.权利要求1所述的长链非编码RNA  lncRNA25659、 权利要求3所述的植物CRISPR/Cas9 载体或权利要求 4所述的植物CRIS PR/Cas9载体重组菌在改良植物株高 中的用途。 7.根据权利要求6所述的用途， 其特 征在于， 所述 植物为玉米。 8.一种株高改良作物品种的培 育方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)构建SEQ  ID NO.1的植物CRIS PR/Cas9载体； (2)将步骤(1)的植物CRISPR/Cas9载体转化至植株中， 编辑长链非编码RNA   lncRNA25659， 筛选得到株高改良的植株。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540357 A 2玉米长链非编码RNA  lncRNA25659及其用途 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学技术领域， 具体涉及一种玉米长链非编码RNA   lncRNA25659及其在株高改良方面的用途。 背景技术 [0002]RNA聚合酶II转录产生两种类型 的RNA， 包括编码RNA和非编码RNA。 根据成熟产物 的大小， 非编码RNA可进一步分为非编码小RNA和长链非编码RNA(long  noncoding  RNA, lncRNA)(Kim  and Sung,2012)。 lncRNA的长度超过200bp， 具有较低的蛋白编码潜能， 不具 有可读框(open  reading frame,ORF)。 lncRNA可以在基因组的多个区域产生， 包括启动子、 增强子、 基因间区域 转录均可产生 lncRNA(Wu et al.,2017)。 [0003]长链非编码RNA  lncRNA通过与靶标互作， 调控基因表达、 RNA加工、 染色质重排、 蛋 白活性等(Chekanova,2015)。 相比于动物lncRNA 研究领域， 植物中lncRNA的功能研究较少。 拟南芥lncRNA  cold induced long antisense  intragenic  RNA(COOLAIR)与polycomb复 合体互作,对春化途径基因FLOWERING  LOCUS C(FLC)进行抑制(Swiezewski  et al., 2009)。 水稻成花激活基因OsSOC1反义转录产生lncRNA  Early flowering ‑completely   dominant(Ef ‑cd)， lncRNA  Ef‑cd变异可以促进水稻提早开花(Fang  et al.,2019)。 过表达 番茄lncRNA  lncRNA39026诱导病程相关基因表达,调控番茄晚疫病抗性( Hou et al., 2020)。 [0004]植物激素赤霉素调控种子萌发、 植株株高、 花粉育性等(Wang  et al.,2017)。 赤霉 素代谢基因semidwarf1(sd1)、 信号调控因子Re duced height(Rht)变异导致的矮秆性状， 是“绿色革命 ”期间矮秆品种培育的突破点。 基于突变体分析等方法， 赤霉素合成、 代谢、 信 号转导的通路被解析。 前体trans ‑geranylgeranyl  diphosphate(GGPP)通过多步酶促反 应， 合成赤霉素。 GA  2‑oxidase(GA2ox)参与赤霉素代谢。 赤霉素、 GA  INSENSITIVE  DWARF1 (GID1)受体、 DELLA蛋白形成的GA –GID1–DELLA模块被用来解释赤霉素信号转导过程(Bl á zquez et al.,2020)。 [0005]长链非编码RNA  lncRNA在转录及转录后水平调控多个生物 学过程， 但调控玉米株 高相关的l ncRNA未见报道。 发明内容 [0006]针对上述现有技术， 本发明的目的是提供一种来源于玉米的长链非编码RNA   lncRNA25659， 探索其在植物激素赤霉素响应中的机制， 进而利用该长链非编码RNA改良玉 米的株高， 创制株高改良的玉米新品种。 [0007]为实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0008]本发明的第一方面， 提供一种来源于玉米的长链非编码RNA， 命名为lncRNA25659， 具有： [0009]1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列； 或说　明　书 1/6 页 3 CN 114540357 A 3