ICS 65.020.30 B 44 DB14 山 西 省 地 方 标 准 DB 14/T 1946—2019 实验动物 中国地鼠生物学数据测定 Laboratory animal Determination of biological data in Chinese hamster 2019 - 12 - 01 发布 山西省市场监督管理局 2020 - 02 - 01 实施 发 布 DB14/T 1946—2019 目 次 前 言 .............................................................................. II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 缩略语 ............................................................................ 1 5 遗传数据 .......................................................................... 2 6 生理数据 .......................................................................... 2 7 生化数据 .......................................................................... 3 8 解剖数据 .......................................................................... 3 附录 A（规范性附录） 染色体数测定方法 ................................................ 5 附录 B（规范性附录） 精子采集 ........................................................ 8 附录 C（规范性附录） lgG 测定方法 .................................................... 9 附录 D（规范性附录） 血液样品采集要求 ............................................... 11 I DB14/T 1946—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则编写。 本标准由山西省科学技术厅提出、归口并监督实施。 本标准起草单位：山西医科大学。 本标准主要起草人：宋国华、陈朝阳、庞文彪、刘茂林、樊林花、高继萍、王晓堂。 II DB14/T 1946—2019 实验动物 中国地鼠生物学数据测定 1 范围 本标准规定了实验动物 中国地鼠（以下简称实验中国地鼠）的遗传数据、生理数据、生化数据、 解剖数据等 4 类生物学特性数据的测定方法。 本标准适用于中国地鼠生物学特性数据质量的控制。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 3 GB/T 14927.1-2008 实验动物 近交系小鼠、大鼠生化标记检测法 DB14/T 1942-2019 实验动物 中国地鼠微卫星DNA检测方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 实验中国地鼠 laboratory Chinese hamster 经人工饲育，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研 究、教学、生产和检定以及其它科学实验的中国地鼠（Cricetulus griseus）。 3.2 数据采集 data collection 数据采集系统是结合基于计算机或者其他专用测试平台的测量软硬件产品来实现灵活的、用户自定 义的测量系统。为了反映实验动物品种品系的生物学特征，需进行各种数据的采集及标准化的工作。 3.3 数据测定 data determination 是指借助于一定的测量工具或一定的测量标准而获得的数据。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 1 DB14/T 1946—2019 ALB：白蛋白 ALT：丙氨酸氨基转移酶 BUN：尿素 CRE：肌酐 GLU：血糖 GRAN：中性粒细胞 HCT：红细胞压积 HGB：血红蛋白 LYM：淋巴细胞 MCH：平均红细胞血红蛋白量 MCHC：平均红细胞血红蛋白浓度 MON：单核细胞 MPV：平均血小板体积 PCT：血小板压积 PLT：血小板 RBC：红细胞计数 CHOL：总胆固醇 TG：甘油三脂 TP：总蛋白 WBC：白细胞计数 5 遗传数据 5.1 生化标记检测 生化标记检测应符合 GB/T 14927.1-2008 第 5 章生化标记检测方法总则。 5.2 染色体数测定 染色体数测定按照本标准附录 A 执行。 5.3 微卫星 DNA 标记检测 微卫星 DNA 标记检测按照 DB14/T 1942-2019 规定检测。 6 生理数据 6.1 血液学 6.1.1 采样要求 麻醉状态下，腹主动脉采血适量，用 0.9% EDTA 抗凝，室温条件下不超过 4 h 测定。 2 DB14/T 1946—2019 6.1.2 检测指标 RBC、HCT、PLT、MPV、WBC、HGB、LYM、MON、GRAN、PCT、MCH、MCHC。其余指标 可根据实验需要测定。 6.2 精液 6.2.1 精液采集 精液采集详见本标准附录 B。 6.2.2 精子活力 用玻璃棒蘸取新鲜精液用 0.9% 氯化钠稀释精液，滴在玻片上，加上盖玻片，中间不要有气泡；在 显微镜下用暗视野进行观察，统计精子 3 种活动（直线前进运动、旋转运动和振摆运动）情况；计算直 线前进运动精子数与精子总数的比值。 6.2.3 精子计数 用 0.5% 碳酸氢钠等倍数稀释精液，4%甲醛固定，混匀后滴入计数池，显微镜下计数。 6.3 IgG 测定 lgG 测定按照本标准附录 C 规定执行。 7 生化数据 7.1 血液生化指标 7.1.1 采样要求 中国地鼠禁食 8 h～12 h，不禁水，采血按照本标准附录 D 规定执行。 7.1.2 检测指标 ALB、ALT、BUN、CRE、GLU、TG、TP 其余指标可根据实验需要测定。 7.2 尿液 宜用膀胱穿刺法或膀胱压迫法收集新鲜尿液，测定尿酸、尿比重、尿糖和尿蛋白。 8 8.1 解剖数据 动物准备 动物解剖前应禁食 8 h～12 h，不禁水，应在采血后采集内脏器官。 8.2 脏器采集 采集颊囊、心、肺、脾、肝、胃、胰腺、肠、肾、肾上腺、睾丸/卵巢、子宫、脑等，可根据实验 3 DB14/T 1946—2019 需求采集其它脏器。 8.3 脏器测量 8.3.1 称重 称重前应将脏器周围脂肪、结缔组织剔除，用滤纸吸去脏器表面的体液，迅速称重。根据脏器大小 选用适宜精度的天平进行称重。 8.3.2 肠道长度测量 应从胃幽门处至肛门处剖取所有肠段。分别测量小肠、结肠、盲肠、直肠的长度，计量单位采用 mm。 4 DB14/T 1946—2019 AA 附 录 A （规范性附录） 染色体数测定方法 A.1 器具 注射器、4 号针头、解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、10 mL 刻度离心管、离心机、载玻片、盖 玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、白纱布小块、量筒、玻璃板。 A.2 药品 0.02％秋水仙素、Giemsa 染液。 A.3 试剂 A.3.1 0.075 mol/L氯化钾溶液 准确称取 0.559 g 氯化钾，溶于 80 mL 蒸馏水中，定容至 100 mL。 A.3.2 固定液 准确量取 3 份甲醇，1 份冰醋酸，混合均匀配制而成。 A.3.3 2％柠檬酸钠溶液 准确称取 2 g 柠檬酸钠，溶于 80 mL 蒸馏水中，定容至 100 mL。 A.3.4 0.85％氯化钠溶液 准确称取 0.85 g 氯化钠溶于 80 mL 蒸馏水中,定容至 100 mL。 A.3.5 磷酸缓冲液（pH 6.8） 取甲液 49.5 mL，乙液 50.5 mL，混匀即可。 甲液：1/15 mol/L 磷酸氢二钠溶液，称取磷酸氢二钠 9.48 g，溶于 900 mL 蒸馏水中，定容至 1000 mL。乙液：1/15 mol/L 磷酸二氢钾溶液，称取磷酸二氢钾 9.07 g，溶于 900 mL 蒸馏水中，定容至 1000 mL。若磷酸氢二钠或磷酸二氢钾含有结晶水，则应根据结晶水的含量重新计算称取量。 A.3.6 Giemsa原液 称取 Giemsa 粉剂 0.50 g，量取丙三醇 33 mL，量取甲醇 33 mL。将 Giemsa 粉溶于少量丙三醇，在 研钵内研磨（30 min）无颗粒为止，再将全部剩余丙三醇倒入。于 56℃温箱内 2 h 后，再加入甲醇，将 配好 Giemsa 原液置于棕色瓶中。 5 DB14/T 1946—2019 A.4 操作 A.4.1 预处理 实验前 3 h～4 h，取健康中国地鼠一只按每克体重 4 μg 秋水仙素，浓度为 0.16 mg/mL 生理盐水的 量将秋水仙素溶液注入腹腔（切勿损伤内脏）。 A.4.2 取股骨 用眼球后血管丛放血处死中国地鼠。处死后立即用剪刀剪开后腿上的皮毛，取出中国地鼠的股骨， 剔掉股骨上的肌肉，并将一小块白纱布包在股骨上用手反复搓动，以除净股骨上肌肉碎渣和结缔组织。 A.4.3 取骨髓细胞 将生理盐水 4 mL，一次性卡介苗注射器通过 4 号针头注入骨髓腔，使骨髓细胞冲洗入 10 mL 锥形 离心管内，吸出杂质，管壁冲净。1000 r/min 离心 5 min。小心吸去大部分上清液，留 0.5 mL 与沉淀物 混匀。 A.4.4 低渗 在离心管中