ICS 71.040.40 G20 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3313—2018 肥料中壳聚糖含量测定 分光光度法 Determination of Chitosan in Fertilizer by Spectrophotometry 2018 - 06 - 12 发布 山东省质量技术监督局 2018 - 07 - 12 实施 发 布 DB37/T 3313—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山东省质量技术监督局提出。 本标准由山东化工标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、济南阿波罗甲壳素肥业有限公司、青岛海力源生物 科技有限公司、山东洁晶集团股份有限公司、济南高新区阿波罗甲壳素工程技术研究中心、青岛海大生 物集团有限公司。 本标准主要起草人：刘金凤、焦毅、于晓菲、齐云、王景超、刘鹏飞、赵丽芳、商姗姗、张娟、刘 有利、张守福、林成彬、王海华。 I DB37/T 3313—2018 肥料中壳聚糖含量测定 分光光度法 1 范围 本标准规定了含壳聚糖肥料中壳聚糖含量的测定方法。 本标准适用于由虾蟹壳为原料加工处理而成的水溶性壳聚糖的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 HG/T 2843 化肥产品 化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液 3 方法原理 肥料中壳聚糖经水解后生成氨基葡萄糖，与乙酰丙酮和对二甲氨基苯甲醛生成红色化合物，在525 nm波长处用分光光度计测定。 4 试剂或材料 本标准中所用试剂、水和溶液的配制，在未注明规格和配制方法时，应符合HG/T 2843的规定。 4.1 盐酸：分析纯。 4.2 4.3 无醛乙醇（或四无乙醇）：分析纯。 氢氧化钠：分析纯。 4.4 无水碳酸钠：分析纯。 4.5 4.6 氢氧化钠溶液：400 g/L。称取分析纯氢氧化钠 40 g，加水至 100 mL。 碳酸钠溶液：c（1/2Na2CO3）=1.0 mol/L。称取无水碳酸钠 2.65 g，加水至 50 mL。 4.7 乙酰丙酮溶液：取乙酸丙酮 3.5 mL，加入碳酸钠溶液（4.6）至 50 mL，置冰箱中备用，应于使用 前一日配制。 4.8 对二甲氨基苯甲醛溶液：称取对二甲氨基苯甲醛 0.8 g，加无醛乙醇（4.2）15 mL 及盐酸（4.1） 15 mL，摇匀。 4.9 盐酸氨基葡萄糖标准品：99.9 %。 4.10 盐酸氨基葡萄糖标准储备溶液：ρ （盐酸氨基葡萄糖）=1.000 mg/mL。称取 105 ℃ 干燥至恒重 的盐酸氨基葡萄糖 0.1 g（准确至 0.0002 g），置 100 mL 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。 4.11 盐酸氨基葡萄糖标准溶液：ρ （盐酸氨基葡萄糖）=0.1000 mg/mL。准确移取盐酸氨基葡萄糖标 准储备溶液（4.7）10.00 mL，至 100 mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀。 5 仪器 1 DB37/T 3313—2018 5.1 分光光度计，带有光程为 1 cm 的吸收池，可在 525 nm 处测量。 5.2 恒温水浴锅。 5.3 5.4 恒温干燥箱。 分析天平：感量 0.0001 g。 6 6.1 分析步骤 试样的制备 固体样品缩分至约 100 g，将其迅速研磨至全部通过 0.50 mm 孔径试验筛（如样品潮湿，可通过 1.00 mm 试验筛），混合均匀，置于洁净、干燥容器中；液体样品经多次摇动后，迅速取出约 100 mL，置 于洁净、干燥容器中。 6.2 试样溶液的制备 称取含壳聚糖约200 mg的试样（固体或液体）适量（称准至0.0002 g），置于50 mL 烧杯中加水溶 解，定量转移到100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，如有必要干过滤，弃去初滤液。准确移取 1.00 mL于25 mL具塞刻度试管中，加5 mL浓盐酸溶液，摇匀，盖上试管塞，于100℃水浴（或能达到同 等水解温度的恒温干燥箱）水解2 h，冷却，用氢氧化钠溶液中和至7（用pH试纸检测），加水稀释至刻 度，摇匀，作为试样溶液。 6.3 标准曲线的绘制 移取盐酸氨基葡萄糖标准溶液（4.11）0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL 分别置于25 mL具塞刻度试管中，然后再分别加入5.00 mL、4.00 mL、3.00 mL、2.00 mL、1.00 mL、0.00 mL蒸馏水至5.00 mL，各加入乙酰丙酮溶液（4.7）2.00 mL，摇匀，于100℃水浴中（1 min后加盖）静 置25 min，取出，用冰水迅速冷却后，加入无醛乙醇3.00 mL，于60℃水浴中静置10 min后，再加入对 二甲氨基苯甲醛（4.8）2.00 mL，用力振摇后，由60℃水浴中静置1 h，取出立即用冷水冷却至室温， 加蒸馏水定容至25mL，摇匀，配成一系列含盐酸氨基葡萄糖分别为0 mg、0.1 mg、0.2 mg、0.3 mg、0.4 mg、0.5 mg的标准工作溶液。在波长525 nm处，用1 cm比色皿，以试剂空白为参比液，测其吸光值，拟 定标准曲线方程。比色过程在30 min内完成。 6.4 试样的测定 6.4.1 准确移取试样溶液 2.00 mL（约含盐酸氨基葡萄糖 300 μ g）置于具塞试管中，按 6.3 中“用蒸 馏水稀释至 5.00 mL”及其后面的步骤进行。对于颜色较深的样品，以 1 mL 盐酸（4.1）代替对二甲氨 基苯甲醛溶液作为空白，其他操作同样品。 6.4.2 将测得的吸光值带入标准曲线方程，求得氨基葡萄糖的质量。 6.5 空白试验 除不加试样外，其他步骤同试样溶液。 7 分析结果的表达 2 DB37/T 3313—2018 以质量分数表示的壳聚糖（以氨基葡萄糖计）的质量分数： w (m1  m0 ) 100  25  0.8309 100 ...........................(1) m 1000  2 式中： m1 ——求得的试样盐酸氨基葡萄糖的质量，单位为毫克（mg）； m0 ——空白盐酸氨基葡萄糖的质量，单位为毫克（mg）； m——试样的质量，单位为克（g）； 0.8309——盐酸氨基葡萄糖换算为氨基葡萄糖的系数。 8 允许差 平行测定结果和不同实验室测定结果的允许差应符合表 1 要求。 表1 平行测定结果和不同实验室测定结果的允许差 海藻酸含量，% 平行结果测定的绝对差值，% 不同实验室测定结果的绝对差值，% ω ≤2.0 ≤0.2 ≤0.4 2.0＜ω ≤5.0 ≤0.5 ≤1.0 5.0＜ω ≤10.0 ≤1.0 ≤2.0 ω ＞10.0 ≤2.0 ≤4.0 _________________________________ 3