ICS 67.120.20 B 40 团体 标准 T/SHZSAQS 013—2020 绵羊皮肤组织切片及 染色技术操作 规程 2020- 12 - 26发布 2020 -12 - 31实施 石河子市质量标准化协会 发布 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 013—2020 I 目 次 前言 ................................ ................................ ............... III 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 3.1 毛囊 ................................ ................................ ............ 1 3.2 初级毛囊 ................................ ................................ ........ 1 3.3 次级毛囊 ................................ ................................ ........ 1 4 试剂配制 ................................ ................................ .......... 1 4.1 10%福尔马林 ................................ ................................ ..... 1 4.2 75 %酒精 ................................ ................................ ....... 2 4.3 85 %酒精 ................................ ................................ ....... 2 4.4 95 %酒精 ................................ ................................ ....... 2 4.5 1%盐酸分化液 ................................ ................................ .... 2 5 样品处理 ................................ ................................ .......... 2 5.1 取材与固定 ................................ ................................ ...... 2 5.2 洗涤 ................................ ................................ ............ 2 5.3 梯度脱水 ................................ ................................ ........ 2 5.4 透明 ................................ ................................ ............ 2 5.5 浸蜡 ................................ ................................ ............ 2 5.6 包埋和修块 ................................ ................................ ...... 3 6 切片制作 ................................ ................................ .......... 3 6.1 切片 ................................ ................................ ............ 3 6.2 展片、贴片及烤片 ................................ ................................ 3 7 脱蜡、苏木素 —伊红（HE）染色及封片 ................................ ................ 3 8 镜下观察 ................................ ................................ .......... 3 附录A（资料性附录） 绵羊皮肤组织横切、纵切图 ................................ 4 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 013—2020 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 本标准附录 A为资料性附录。 本标准起草单位：新疆农垦科学院畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人：甘尚权、徐梦思、石国庆、代蓉、万鹏程。 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 013—2020 1 绵羊皮肤组织切片及 染色技术操作 规程 1 范围 本规程规定了石蜡切片法观察绵羊皮肤组织的术语和定义、试剂配制、样品处理、切片制作、 苏木素—伊红（HE）染色、镜 下观察等。 本规程适用于绵羊皮肤组织切片的制作及观察。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用 于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析试验室用水规格和试验方法 DB32/T 1824 禽肉肌纤维特性的测定 石蜡切片法 3 术语和定义 以下术语和定义适用于本文件。 3.1 毛囊 毛囊是包围在毛发根部的口袋形囊状组织 ，内层是上皮组织性毛囊 ，外层是结缔组织性毛囊 ， 内层与表皮相连 ，外层与真皮相连。毛囊包括连接组织鞘，内根鞘，外根鞘，毛球和毛干几个部分。 大部分哺乳动物毛囊分为初级毛囊和次级毛囊。 3.2 初级毛囊 初级毛囊发生较早，毛球大，毛囊较长、较粗，有两个发达的皮脂腺，毛干一般有髓质。 3.3 次级毛囊 次级毛囊发生较晚，毛球小，毛囊短而细，无或仅有一个不发达的皮脂腺，毛干没有髓质。 4 试剂配制 4.1 10%福尔马林 取1体积的37 %甲醛与9体积的水混匀配成 10 %福尔马林用于固定组织样品。 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 013—2020 2 4.2 75 % 酒精 取7.5体积的无水乙醇与 2.5体积的水混匀配 成75 %酒精。 4.3 85 % 酒精 取8.5体积的无水乙醇与 1.5体积的水混匀配成 85 %酒精。 4.4 95 % 酒精 取9.5体积的无水乙醇与 0.5体积的水混匀配成 95 %酒精。 4.5 1%盐酸分化液 取99体积的无水乙醇与 1体积的盐酸混匀配成 1 %盐酸分化液。 5 样品处理 5.1 取材与固定 绵羊屠宰后，取 0.8 cm ×0.8 cm ×0.4 cm腹部皮肤组织，用 20倍体积的 10 %福尔马林固定 24 h， 再用20倍体积的 10 %福尔马林 重复固定24 h。切取皮肤组织时动作要轻， 勿用力牵拉，以免组织 内 部结构发生变化。 5.2 洗涤 固定后的皮肤组织在进行逐级脱水之前需用流水冲洗 24 h。 5.3 梯度脱水 组织脱水的目的是将组织内的水分用酒精置换出来， 使组织逐渐变硬，便于后期二甲苯透明及 石蜡浸蜡。脱水过程需逐级增加。具体步骤如下： 75 %酒精过夜 →85 %酒精1 h→95 %酒精1 h→100 % 酒精1 h。 5.4 透明 组织透明的目的是将组织内的无水酒精用透明剂置换出来。一般常用的透明剂有二甲苯、甲苯 等，都是能分别与石蜡和酒精相溶的有机溶剂。透明时要特别注意观察，组织周边透明即可。 5.5 浸蜡 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 013—2020 3 浸蜡过程是将 洁净的石蜡深入到组织间隙的过程，石蜡有软蜡、硬蜡之分，软蜡熔点为 45～ 50 ℃，硬蜡熔点为 56～58 ℃，全程在自动恒温箱中进行。具体步骤如下：蜡杯（ 1） 65 ℃ 3 h→ 蜡杯