ICS67.120.10 CCSB40DB36 江西省地方标准化指导性技术文件 DB36/Z002—2022 动物源性食品中金刚烷胺的检测 量子点微球荧光免疫层析法 Determinationofamantadineresidueinanimalderivedfood—— Quantumdotmicrospherelateralflowimmunoassay 2022-12-06发布 2022-12-06实施 江西省市场监督管理局发布 DB36/Z002—2022 I目  次 前  言.............................................................................II 1范围...............................................................................1 2规范性引用文件.....................................................................1 3术语和定义.........................................................................1 4原理...............................................................................1 5试剂和材料.........................................................................1 6仪器和设备.........................................................................2 7试样制备...........................................................................2 8测定步骤...........................................................................2 9结果表述...........................................................................3 10其他..............................................................................3 DB36/Z002—2022 II前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省市场监督管理局提出并归口。 本文件起草单位：南昌大学、江西省市场监督管理局、江西省检验检测认证总院、江西维邦生物科 技有限公司。 本文件主要起草人：赖卫华、龚启亮、郭平、余颐、彭娟、张威、熊华亮、熊勇华、陈媛、刘文娟、 罗凯、李响敏、黄小林、唐丽君、张干、舒馨潓、翟文莉、程昱、熊佳、卢俊。 DB36/Z002—2022 1动物源性食品中金刚烷胺的检测量子点微球荧光免疫层析法 1范围 本文件规定了动物源性食品中金刚烷胺残留量的量子点微球荧光免疫层析检测方法。 本文件适用于鸡肉、鸡蛋和猪肉中金刚烷胺的快速检测。 本方法检测金刚烷胺的检出限为0.1μg/kg，定量限为0.3μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB31660.5食品安全国家标准动物性食品中金刚烷胺残留量的测定液相色谱-串联质谱法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 本方法以量子点微球为荧光标记物，基于竞争抑制免疫层析技术原理，通过荧光免疫分析仪进行数 据读取和分析，根据已设定的标准曲线计算样品中待测物质的含量，对动物源性食品中金刚烷胺进行定 量检测。 5试剂和材料 除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。 5.1乙酸乙酯(CH3COOC2H5)。 5.2正己烷(C6H14)。 5.3二水合磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）。 5.4十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。 5.5氯化钠（NaCl）。 5.6磷酸二氢钾（KH2PO4）。 5.7氯化钾（KCl）。 5.8盐酸（HCl）。 5.9氢氧化钠（NaOH）。 5.10试样提取剂A：称取8.0g氯化钠（5.5）、0.2g磷酸二氢钾（5.6）、0.2g氯化钾（5.7）、2.9g 十二水合磷酸氢二钠（5.4），加入约500mL水溶解，再加入盐酸（5.8）溶液0.5mL，加水定容至1L。 DB36/Z002—2022 25.11试样提取剂B：称取20.0g氢氧化钠（5.9），加入约900mL水溶解混匀，定容至1L。 5.12试样复溶液磷酸盐缓冲液（10mmol/L，pH7.0）：称取8.0g氯化钠（5.5）、2.77g十二水合磷 酸氢二钠（5.4）、0.352g二水合磷酸二氢钠（5.3），用水溶解并定容至1L。 6仪器和设备 6.1分析天平：感量为0.01g。 6.2微量移液器：20µL～200µL、100µL～1000µL和1mL～10mL。 6.3旋涡混合器：转速≥2500r/min。 6.4恒温孵育器：设定孵育温度为37℃，误差不超过±1℃。 6.5荧光免疫分析仪：激发波长为365nm±5nm，发射波长为610nm±5nm。 6.6样品浓缩仪：设定温度误差不超过±1℃。 6.7均质机：转速≥5000r/min。 6.8离心机：转速≥4000r/min。 6.9离心管：10mL和50mL。 6.10金刚烷胺量子点微球免疫层析包装盒：含量子点微球免疫层析试纸条和标准曲线内置卡（ID卡）， ID卡内设对应批次标准曲线。 7试样制备 7.1试样制备 称取约200g具有代表性的组织或禽蛋（去壳）样品，充分均质混匀，均分成两份分别装入洁净容 器作为试样和留样，密封，标记。留样置于-20℃保存。 7.2试样前处理 7.2.1准确称取试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中。 7.2.2加入2mL试样提取剂A（5.10），涡旋振荡2min，加入1mL试样提取剂B（5.11），涡旋振 荡30s，最后准确加入4mL乙酸乙酯（5.1），手动振荡混匀30s，使用离心机（6.8）4000rpm离心 2min或静置5min待溶液分层。 7.2.3准确吸取2mL上清液于10mL离心管中，于65℃用样品浓缩仪（6.6）吹干。 7.2.4加入1mL正己烷（5.2），漩涡振荡混匀10s，加入500μL试样复溶液（5.12），轻轻颠倒混 匀，确保离心管壁上的残留均能被试样复溶液混匀（请勿振荡）。 7.2.5静置1min，溶液分层后下层液体为待测液。 注：不同厂家量子点微球免疫层析试纸条所用的样品前处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进行操 作。 8测定步骤 8.1测试前打开荧光免疫分析仪（6.5），确认包装盒中的ID卡与产品批号是否匹配，插入ID卡，在 仪器测试界面点击“读卡/读项目”，界面出现“读取完成”，点击“确认”即可使用。 8.2将恒温孵育器（6.4）开机，待温度升至37℃即可使用。 8.3从密封包装袋中取出金刚烷胺量子点微球免疫层析试纸条，在30min内使用。